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waters高效液相色谱仪检测人血浆中全反式维甲酸血药含量

发布时间:2011/3/14 10:19:36阅读人数:1898

waters高效液相色谱仪检测人血浆中全反式维甲酸血药含量

1实验所用的仪器设备

Waters高效液相色谱仪(515型恒流泵,486型紫外检测器,Millennium32色谱工作站xw__80A旋涡混合器;3K18高速冷冻离心机;高速离心机。

2 色谱条件

色谱柱为Supelcosil LC-18DB(5 Ixm46 mm×250 mm);柱温为室温。流动相 :甲醇--冰乙酸体积比82171);流速 15 mL·min 。检测波长 340 nm

3 血药浓度测定法

3.1 ATRA对照溶液配制 精密称取 ATRA对照品适量,以甲醇溶解并定容,制得浓度为 100 Ixg·mLATRA储备液。将 ATRA储备液以甲醇稀释,配制浓度 分别 05l255l02550 g·mL ATRA对照溶液。

3.2 内标液配制 取内标阿维 A酸适量,置于 100mL量瓶中,以甲醇溶解并定容,制得浓度为75 g·mL 的内标液。

3.3 样本处理 精密吸取血浆样品l mL,置 10 mL具塞离心试管中,加入内标溶液 20 L,旋涡混合 30 S。加入 1 mol·L HC1溶液500 IxL,漩涡混合 30 S,再加入乙酸乙酯 3 mL,旋涡混合 1 min4 500 rmin离心5 min。转移上层液至尖底试管中,于 37 qC水浴中氮气流吹干。残渣加入流动相200 IxL漩涡混合30 s使溶解,l0 000 rmin离心 5 min,取上清液 50 进样,记录色谱图,以 ATRA峰面积(As)与内标峰面积(Ai)之比代入标准曲线计算 ATRA血药浓度。

3.4 标准曲线 精密量取空白血浆 1 mL,置 10 mL具塞离心管中,分别加入不同浓度 ATRA对照溶液 20 L,混匀 ,使血药浓度分别为 102O50100200500 1000 ng·mL~。按样本处理方法操作,以不 同浓度ATRA系列溶液的A A 来计算A(A=A Ai),以A

值为纵坐标,ATRA质量浓度(P)为横坐标进行直线回归。

4

本文建立了一种灵敏、准确的ATRA血药浓度高效液相色谱测定法,适用于 APL病人 ATRA血药浓度的常规监测及临床药代动力学研究。通过监测 ATRA血药浓度 ,可以更好地了解在某些 APL病人连续用药治疗中临床复发及耐药的原因。ATRA化学性质活泼,见光易异构化或氧化降解,因此在样品提取过程中应特别注意避光操作。提取过程中血浆加入 1 mol·L HC1溶液,使血浆酸化,可提高萃取 回收率 ,乙酸乙酯一步萃取可使萃取回收率达到80%以上。

 

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