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用色谱分析法建立兽药残留分析方法的基本方法

发布时间:2011/6/1 12:39:12阅读人数:1456

用色谱分析法建立兽药残留分析方法的基本方法:

 

摘 要 : 从分析兽药残留的现状引出色谱分析应用的
普遍性 , 着重介绍 了以色谱分析法建立兽药残留分析方法
的基本步骤 , 供从事兽药残留分析的色谱工作者参考。 
关键词 : 兽药残留; 高效液相色谱法 : 色谱法
近 2 0年来 , 兽药( 包括药物添加剂 ) 在畜牧
业 中的应用 日益广泛 , 但是兽药 的使用无疑会导
致动物体 内药物的滞留或蓄积, 并以残留的方式
进入人体及生态系统。兽药残留对人类及环境的
危害主要是慢性 、 远期和累积性 的, 如致癌、 发育
毒性、 体内蓄积 、 免疫抑制 、 致敏和诱导耐药菌株
等。动物性食品中的兽药残留已成为公认的农业
和环境问题 , 因此对残留的监测与控制 已经是 目 
前 国内外兽药研究 、 开发 、 使用和管理中的重要
内容。 
随着兽医学和兽药科学的迅速发展 , 经过十
几年的积累 , 基于分析化学 、 药物化学 、 临床药理
与毒理学 以及管理科学之上的兽药残 留分析 已
成为一门新兴学科, 其中心任务是为动物和动物
性食品中的兽药残留监控提供分析手段 . 内容包
括食 品残留( 药物原形及代谢产物) 的含量测定
与结构鉴定 ( 静态残留分析 ) 以及组织分布与代
谢( 动态残留分析) 。残留分析不仅是兽药残留研
究和监控的重要基础 , 而且是兽药代谢 、 临床药
理和生物药剂学等兽药理论及应用研究 的必要
手段。与药品分析不同, 残留分析的特殊性和复
杂性在于痕量 、 动态的待测物存在于复杂的生物
样品中,在于将分析手段与兽药的理化性质、 体
内过程 、 存在状态以及药理毒理相结合 , 在于样
品基质和待测组分的不确定性 , 所以分离和检测
是残留分析的两个基本方面, 高分辨率和高灵敏
度是其发展的两大精髓 。现代色谱和光谱技术 . 
特别是 2 0世纪 8 0年代 以来高效液相色谱 、 毛细
管区域 电泳 、 质谱 、 免疫分析及联用技术在残留
分析方面的研究与应用取得 了长足进展, 利用这
些技术可以测定 p p b ( 1 0 _ 9 ) ~ p p t ( 1 0 — 2 ) 水平的残留 
组分。人们在努力改进残留分析效能的同时更注
重提高分析效率 、降低分析成本和减少环境污
染。 
色谱法是近代分析化学中发展*快 、 应用*
广的分离分析技术 , 在化学 、 生物学等领域发挥
着越来越重要的作用 , 并正发展成为一门新兴学
科。现代色谱分析将分离和连续测定结合。 也可
以浓缩 、 分离 、 测定联用 , 对复杂体系中组分、 价
态、 化学性质相近的元素和化合物进行分析 。色
谱分析仍是残留分析技术发展的主流。下面以色
谱分析法为例说明残留分析方法建立的基本步

1 文献检索
残留分析过程十分复杂 ,所用的操作方法 、 
试剂和仪器较多,方法设计带有较多经验成分 。 
所 以无论是移植 、 改进或设计新的分析方法都具
有较高难度。残留分析中极少存在可供直接移植
使用的“ 标准方法” 。文献检索通常仅能显示*适
宜 的分析方法 , 并提供样品处理 、 分离和检测方
面的粗略信息。通过查阅文献可以对以往分析方
法进行比较和借鉴 , 了解与方法设计相关 的背景
资料。这些工作对于研究者根据具体的试验条件
调整 、 改进或新建立符合要求的分析方法都十分
重要 。设计全新的分析方法时 , 如针对新对象或
采用新技术, 可以从较早发表的化学合成文献得
到待测物理化性质或分离方面的原始资料。 或从
具有相近结构或官能团化合物 的分析方法 中获
得某些信息或启示。 
通过查 阅文献 , 除掌握有关分析方法研究与
应用的动态和存在的问题之外 . 还需要 了解 以下
内容 : 待测物的理化性质 , 如极性 、 溶解性 、 酸碱 
性 、 稳定性 、 熔点或蒸汽压 、 波谱学性质等 ; 体 内
代谢过程 , 包括代谢产物 、 组织分布 、 排泄途径和
药动学性质( 生物利用度 、 t i t 2   V   、 蛋 白结合率 ) ; 药
理毒理学 , 如残留毒性 、 MP 【 J s 、 WT D等。 
2 建立测 定方法
首先建立测定方法和线性范围. 为各种后续
工作提供分析手段 . *后根据干扰和使用情况逐
步确立测定条件和建立标准曲线。 
多数兽药及其代谢产物属 中等极性或较高
极性化合物 , 不能直接进行 GC( 气相色谱) 分离 , 
HP L C是的测定方法 .目前比较成熟和常用
的检测器 有紫外检测器 ( UV D) 、荧 光检测器
( F L D) 和电化学检测器( E C H D) , 要求待测组分具
有紫外/ 可见或荧光发色团( 共轭双键结构) , 或电
化学活性基团。对绝大多数兽药而言, 反相( R P) 
HP L C是标准的分离方法 , 操作方便 , 易获得尖锐
的峰形和 良好分离。根据待测物 的极性或酸碱
性 , 通过优化流动相的有机溶剂比例、 p H、 离子强
度 、 离子对试剂和柱温达到分离 目的。必要时可
以改变反相色谱柱的类型, 如 C  C   、 交联聚苯乙
烯等。 
G C有许多灵敏的选择性和通用检测器供选
择, 如氢火焰离子化检测器 ( F I D) 、 电子俘获检测
器( EC D) 、 氮磷检测器 ( N P D) 、 火焰光 度检测器
( F P D) 和液相层析质谱仪( MS ) , 但大部分兽药需
经过衍生化使极性降低后才能进行分析。 
3 建立样 品处理方 法

般采用纯水作为样品基质进行预试 , 目的
是了解液一 液萃取( UJ E) 或 固相萃取( S P E) 条件 、 
试剂干扰和回收率情况. 然后再依次用空白样品
和标准品添加样品进行研究。 
提取与净化方法的选择决定于待测物 的理
化性质 、 样品基质的性质( 水分、 蛋白质和脂肪含
量) 、 是否需要衍生化以及测定方法。无论*终用
何种提取或净化方法 , 一般均包含专门或兼有的
脱蛋 白质 、 脱脂肪和脱水步骤 . 这些常见的基质
成分会干扰分析过程 、 污染色谱柱和检测器。 
HP L C测定中,溶解样品所用溶剂要与流动
相互溶 , 与流动相接近, 以免干扰色谱平衡 , 

导致色谱峰变形或保留值改变。当 RP — HP L C流
动相中水的含量高于 3 0 %时 , 用纯甲醇和乙腈制
备的终样品溶液进样会严重影响分离和峰形。 
4 标 准 曲线
测定条件确定后 , 即可配制系列浓度的标准
液制备标准曲线。至少设 4个浓度 , 每个浓度水
平设 3次重复。制备标准曲线的浓度须涵盖样品
可能的浓度范围. 不进行外推计算。可以采用外
标法或内标法定量。残留样品浓度波动范围和测
定误差较大 . 宜采用标准曲线或回归方程计算含
量。在使用过程中需每 日对标准曲线进行校正。 
5 稳定性试验

般包括标准溶液和样 品在贮存条件下的
稳定性试验 , 如室温 、 冷冻和反复冷冻一解冻条
件下的稳定性。 
6 分析方 法评 价
为保证分析结果 的质量 , 任何一种分析方法
根据分析对象和要求都必须满足一定的效能指
标 , 如准确度 、 精密度 、 灵敏度等。根据这些指标
可以对分析方法的设计进行质量控制和评价 . 也
便于不同分析方法间进行 比较。 
这项试验一般采用标准添加样品进行 . 是研
究建立新分析方法的重要组成部分和试验依据。 

般至少设立 3个浓度( 1 0 、 1 、 0 . 1 MR L) , 每个浓
度水平设 4次重复 . 经统计处理后可以同时获得
各种效能指标。 
7 分析方法报告
分析方法报告主要包括以下内容 : 
7 . 1概述 对象的分析方法发展现状及存在
的问题 。 
7 . 2 操作方法 稳定性试验方法 , 提取方法 , 
净化方法, 测定方法( 分离方法 、 检测方法) 。 
7 . 3 方法评价 标准曲线 ,回收率 ,变异系
数 , 检测限, 定量限, 选择性 。 
7 . 4 应用
7 . 5 附件 标准品 、 空 白样品、 添加样品和实
测样品的色谱图, 参考文献。 
摘  要 :通过对国内外饲料加工工艺现状的研究 , 提
出“ 先配后粉” 工艺在我国实施的可行性 ; 和膨化和制粒技
术在我国运用的必要性, 并探讨了饲料加工 自动化的发展
趋 势 。 
关键词 : 后 粉 工艺 ; 后 置添加 :自动 化
改革开放 2 0年来 ,我 国饲料工业 已建立较
为完善的饲料工业体系 , 作为饲料工业发展 的硬
件——饲料机电工业 , 在经过“ 七· 五” 、 “ 八 · 五” 、 
“ 九 · 五” 饲料科技攻关 , 饲料机械的设计制造水
平显著提高 , 部分设备的工艺技术性能已接近国
际水平 ,基本满足生产各种饲料产 品的需
要 , 为我国饲料工业上质量 、 上水平 、 上规模 、 上
效益打下了良好的基础。我们应抓住机遇 , 借鉴
国外的技术和管理经验 .依照企业 自身实
力 , 开发应用新工艺、 新设备和新技术。 
1 国内外粉碎与配料工艺的现状
根据粉碎与配料先后关系的不同, 饲料加工
工艺可分为“ 先粉碎后配料” 和“ 先配料后粉碎” 
两大工艺。前者以北美和亚洲一些国家为代表 , 
后者多为西欧国家的饲料厂所采用 。目前 , 国内
外饲料机械公司都在寻求两者*佳结合点, 相互
弥补缺陷, 从而使工艺流程更加合理。在国外, 这
种“ 混合式” 的工序已经实施 , 但没有达到*佳 的
效果。在国内, 也有人曾提出“ 粉碎一 配料一 粉碎” 
的工艺 , 但因其产量低、 适应性不强 , 仍需进一步
探索。 
我国饲料厂大都采用“ 先粉碎后配料” 工艺 , 
原 因在于该工艺对技术和设备及控制元件质量
要求不高 , 同时, 可节约能耗, 缩短生产过程 。随
着饲料配方采用原料品种增多 , 工厂添置费用的
提高 , 研究“ 先配料后粉碎” 在我国的适应性很有
必要 . 或者将两种工艺结合起来 , 探索更佳的“ 混
合型” 工艺。 
1 . 1后粉( 先配料后粉碎) 工艺
1 . 1 . 1后粉工艺的优缺点
后粉工艺的优点为 : 料仓少 , 仓中物料不易
结拱 。 原料立筒库可以作为配料仓 ; 生产过程更
换配方较容易 , 受原料的影响较小 ; 原料变化对
粉碎机影响小 , 针对不同混合料 , 粉碎机有时利
用效率高; 具有初步混合作用 , 颗粒质量好 , 粒度
均匀. 有利于混合均匀度和制粒效果的提高。 
后粉工艺的缺点为 : 由于此工艺的粉碎间隔
周期性进行 , 因而粉碎机工作负荷不平稳 ; 配料
与粉碎两工序生产能力匹配性较高, 工序之间制
约性强 , 因而要求 自动化控制水平较高; 装机容
高效液相色谱仪

 

原创作者:杭州瑞析科技有限公司

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